氯膦酸二鈉脂質(zhì)體Clodronate Liposomes·清除腦巨噬細(xì)胞解決方案

巨噬細(xì)胞清除結(jié)果：

在氯膦酸處理的培養(yǎng)物中，小膠質(zhì)細(xì)胞被顯著去除(圖A, 3)，而氯膦酸鈉對神經(jīng)元密度無影響

巨噬細(xì)胞清除結(jié)果：

腦室內(nèi)的氯膦酸鈉導(dǎo)致血管周圍CD206陽性巨噬細(xì)胞的清除，但不影響小膠質(zhì)細(xì)胞(P2Y12R標(biāo)記，綠色)。用內(nèi)皮標(biāo)記物番茄凝集素(藍色)觀察血管。

動物模型：C57BL/6雄性小鼠(8 ~ 10周齡，23 ~ 25 g)；C57BL/6背景Cx3cr1GFP/+小鼠(雄性，8 ~ 10周齡，23-25 g)

巨噬細(xì)胞清除方法：

Cx3cr1GFP/+小鼠和C57BL/6小鼠，將1 μL的Liposomes 或1 μL的對照Dil-Lip注射到左紋狀體(距囟門前方0.8毫米，外側(cè)2.0毫米，深度為3.0毫米)

巨噬細(xì)胞清除結(jié)果：

注射Clodronate liposomes于24小時開始在腦實質(zhì)中消耗小膠質(zhì)細(xì)胞，注射1 μL Dil-Lip后第1天的一系列腦切片（脂質(zhì)體用紅色熒光染料Dil標(biāo)記）進入紋狀體（圖A第一排）或腦側(cè)室（圖A第二排）

代表性圖像顯示，紋狀體注射 Dil-Lip或Clodronate liposomes后不同時間點Cx3cr1-GFP+小膠質(zhì)細(xì)胞（綠色）的耗竭。（圖A第三、四排）顯示放大后的小膠質(zhì)細(xì)胞圖像。

注射1 μL Clodronate liposomes后紋狀體Cx3cr1-GFP+細(xì)胞的量化數(shù)據(jù)（圖B）。

C.

在Clodronate liposomes注射后的第1、4、7天，用流式細(xì)胞術(shù)分析Cx3cr1-GFP+小膠質(zhì)細(xì)胞。圖中顯示了代表性的點圖，并顯示了紋狀體細(xì)胞群中Cx3cr1-GFP+的百分比。紅色：Cx3cr1-GFP?細(xì)胞群；綠色：Cx3cr1-GFP+細(xì)胞群（圖C）。

圖表顯示注射Clodronate liposomes后紋狀體和皮層中剩余Cx3cr1-GFP+種群的百分比（圖D）。

腦巨噬細(xì)胞清除參考模型四

巨噬細(xì)胞清除方法：海馬切片培養(yǎng)中加入氯膦酸脂質(zhì)體體外18天，濃度0.5 mg/mL（氯膦酸共500 µg），24小時后，用培養(yǎng)基輕輕洗滌培養(yǎng)物，并給予另一劑量的0.5 mg/mL氯膦酸脂質(zhì)體，再孵育24小時，此時再次洗滌培養(yǎng)物，置于新培養(yǎng)基中，孵育7天。第7天，培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞耗盡，準(zhǔn)備進行后續(xù)實驗。

巨噬細(xì)胞清除結(jié)果：

小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的代表性細(xì)胞特異性標(biāo)記染色（Iba1，
GFAP, CNPase和NeuN）分別顯示與對照組（第一排）相比氯膦酸脂質(zhì)體處理（第二排）的切片小膠質(zhì)細(xì)胞耗竭，且對其他細(xì)胞類型沒有影響（比例尺，20毫米）。